水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价

作者：秦飞燕; 孙杰; 马凡舒; 王洋; 柏玲; 张蕾^*; 闫喜军^*

来源：中国兽医学报, 2019, 39(11): 2135-2151.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.11.07

• 阿留申病毒
• VP2蛋白
• 表位基因
• 原核表达
• CIEP
• ELISA

为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显示,融合蛋白在IPTG终浓度为1 mmol/L、37℃诱导表达4 h,蛋白表达量最高,其大小约为30 000,以可溶性表达形式为主;融合蛋白能与6×His单克隆抗体及ADV多克隆抗体发生特异性反应,说明该蛋白具有较好的反应原性;且该蛋白作为对流免疫电泳技术(CIEP)检测抗原与ADV阳性血清之间产生了明显的沉淀线,证实了该蛋白作为CIEP检测抗原的可能性。以纯化后的重组蛋白为抗原初步建立的间接ELISA方法具有较高的准确性。结果表明该蛋白具有良好的血清学检测价值,为水貂阿留申病血清学诊断方法的建立奠定了基础。

• 单位
  河南省农业科学院; 中国农业科学院特产研究所; 分子生物学国家重点实验室; 农业部