白细胞介素17通过上调肌细胞增强因子2C促进PC9细胞程序性死亡配体1表达

作者：吴宁霞; 应帅; 葛文; 李雅; 阮玉婷; 王伟民; 李玉; 张婧; 邱文; 王迎伟^*; 赵晨卉^*

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2023, 37(05): 331-342.

DOI：10.3867/j.issn.1000-3002.2023.05.002

• 非小细胞肺癌
• 白细胞介素17
• 肌细胞增强因子2C
• 程序性死亡配体1

目的 研究白细胞介素17(IL-17)促进PC9细胞表达程序性死亡配体1(PD-L1)的分子调控机制。方法 用IL-17 50μg·L-1刺激PC9细胞0(细胞对照)，1,2,3,6和12 h，用逆转录PCR(RT-PCR)和Western印迹法分别检测PC9细胞肌细胞增强因子2C(MEF2C)和PD-L1 mRNA及蛋白表达。构建pIRES2-MEF2C及其对照质粒pIRES2-EGFP和MEF2C短发夹RNA(shMEF2C)及其对照质粒shCTR，分别转染PC9细胞48 h(shRNA质粒转染后加IL-17刺激3 h)，即分pIRES2-EGFP和pIRES2-MEF2C组或shCTR,shCTR+IL-17和shMEF2C-4+IL-17组，同上检测MEF2C和PD-L1 mRNA及蛋白表达。另构建PD-L1启动子全长(pGL3-PD-L1-FL)和不同截短的pGL3-PD-L1-1～pGL3-PD-L1-4质粒。先将pGL3-PD-L1-FL与pIRES2-MEF2C共转染PC9细胞48 h或与shMEF2C-4共转染48 h加IL-17刺激3 h，用双荧光素酶报告基因实验测定PD-L1-FL启动子活性(分组同上)。此外，将对照pGL3-basic和pGL3-PD-L1-FL及pGL3-PD-L1-1～pGL3-PD-L1-4截短启动子质粒分别转染PC9细胞48 h再加IL-17刺激3 h或与pIRES2-MEF2C共转染PC9细胞后再测PD-L1启动子活性。结果 与细胞对照组相比，IL-17刺激2 h,MEF2C和PD-L1 mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),3 h达峰(P<0.01)。与pIRES2-EGFP组相比，pIRES2-MEF2C组PD-L1 mRNA(P<0.05)和蛋白表达(P<0.01)及启动子活性(P<0.05)明显升高；与shCTR组相比，shCTR+IL-17组上述指标均显著升高(P<0.05,P<0.01)，但shMEF2C-4+IL-17组则明显低于shCTR+IL-17组(P<0.01)。此外，与pGL3-basic组比，IL-17刺激或过表达MEF2C可增加pGL3-PD-L1-FL,pGL3-PD-L1-1,pGL3-PD-L1-2和pGL3-PD-L1-3启动子活性(P<0.05,P<0.01)，但pGL3-PD-L1-3和pGL3-PD-L1-4启动子活性则显著低于pGL3-PD-L1-FL组(P<0.05,P<0.01)，提示PD-L1启动子这2个区域含有MEF2C的结合部位。结论 IL-17通过上调MEF2C表达促进PC9细胞PD-L1表达，其机制可能与MEF2C结合PD-L1启动子的相应部位有关。

• 单位
  南京医科大学; 南京医科大学第一附属医院