成年小鼠视网膜穆勒细胞向神经干细胞转化的实验研究

作者：肖宗宇; 李文辉^*; 惠超杰; 张广华; 唐万峰; 杨生龙; 曹立新; 马进海; 巨虎

来源：西部医学, 2020, 32(02): 198-202.

• Muller细胞
• 神经干细胞
• 细胞分化

目的探讨Muller细胞在视网膜损伤后能够转化为神经干细胞,并经诱导后可以分化、新生视网膜中多种类型的神经元,研究该培养细胞是否具有多能向分化能力。方法取72只雌性成年SD小鼠建立视神经切断模型,采用酶解法对SD小鼠视网膜Muller细胞进行消化传代提纯。取第4代胰酶消化过的视网膜Muller细胞,用含有碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)、表皮生长因子(EGF)的改良的Eagle培养基(DMEM)-F12培养基培养5d,用含有0.5μmol/L RA、1μg/L BDNF与0.5%胎牛血清的DMEM培养基进行10d诱导分化,采用免疫荧光染色法对去分化及再分化后的细胞进行鉴定。结果免疫荧光染色鉴定3～4代培养的Muller细胞结果显示,特异性标记物谷氨酰胺合成酶(GS)和谷氨酸转运体(GLAST)抗体表达阳性,呈现红色,荧光染色GS和GLAST抗体表达阳性细胞比例分别为(92.76±4.28)%与(95.28±2.79)%。对去分化后的Muller细胞球给予免疫荧光染色鉴定,结果显示特异性标记物巢蛋白(Nestin)表达阳性,呈现红色,荧光染色阳性细胞比例为(95.37±1.46)%。免疫荧光染色鉴定去分化后的Muller细胞球,结果显示神经胶质细胞特异性标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性,呈绿色,荧光染色阳性细胞比例为(10.28±3.37)%。细胞抗5溴-2脱氧尿苷(BrdU)的表达阳性,呈现红色,荧光染色阳性细胞比例为(90.44±4.23)%。免疫荧光染色鉴定诱导分化后的Muller细胞球,结果显示神经节细胞的特异性标记物Thy1.1表达阳性,呈现绿色,主要为轴突和细胞质,荧光染色阳性细胞比例为(21.25±4.62)%。结论视网膜Muller细胞是一种视网膜干细胞潜在来源细胞,细胞因子刺激能够使体外培养的视网膜Muller细胞获得干细胞特征。

• 单位
  青海大学附属医院