基于JNK通路探讨调更汤对GT1-7下丘脑神经元细胞凋亡的保护作用

作者：李盛楠; 刘洋; 刘小菲; 丛超; 刘慧聪; 归雯佳; 王月娇; 肖珊; 单鑫; 徐莲薇^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2019, 25(20): 49-55.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20192037

• 绝经综合征
• 下丘脑神经元细胞凋亡
• 调更汤
• c-Jun氨基末端激酶通路

目的:研究调更汤通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路改善下丘脑神经元细胞凋亡的作用机制。方法:采用下丘脑神经元细胞GT1-7细胞株,以三丁基氯化锡(TBTC)诱导模拟神经元细胞凋亡模型作为模型组(1 mg·L-1),以17β-雌二醇(17β-E2)为阳性药物作为17β-E2组(100 nmol·L-1),调更汤低、中、高剂量组(31. 25,62. 5,125 mg·L-1)进行干预。以倒置荧光显微镜观察细胞形态学变化;细胞增殖毒性(CCK-8)法检测细胞活力; Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核的形态改变;Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染色法检测下丘脑神经元细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JNK通路凋亡相关蛋白凋亡信号调节激酶1(ASK1),JNK,p53,活化半胱氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)表达水平及JNK抑制剂SP600125干预后磷酸化JNK(p-JNK),cleaved Caspase-3的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞活力显著降低(P <0. 01),细胞凋亡率显著升高(P <0. 01),JNK通路相关蛋白磷酸化ASK1(p-ASK1),p-JNK,磷酸化p53(p-p53),cleaved Caspase-3的表达显著增加(P <0. 01)。与模型组比较,调更汤显著改善GT1-7细胞活力(P <0. 01),降低细胞凋亡率(P <0. 01),调节p-ASK1,p-JNK,p-p53,cleaved Caspase-3蛋白的表达;高剂量调更汤联合应用SP600125(10μmol·L-1)处理后,更显著的抑制GT1-7细胞p-JNK,cleaved Caspase-3的蛋白表达(P <0. 01)。结论:调更汤通过JNK通路改善下丘脑神经元细胞凋亡,为调更汤治疗绝经综合征和中枢神经保护作用提供理论依据。

• 单位
  上海中医药大学附属龙华医院