伪狂犬病病毒TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

作者：吕玉金; 张世军; 吴凤笋; 赵攀登; 刘玲玲; 李文刚; 饶宝^*

来源：中国兽医杂志, 2022, 58(05): 22-28.

• 伪狂犬病病毒
• gE基因
• gB基因
• 实时荧光定量PCR

为建立快速、特异、灵敏的鉴别伪狂犬病病毒(PRV)野毒株和疫苗株的方法，本试验基于PRV gB和gE基因保守区域序列，设计了2对特异性的引物和探针，探针标记不同发光基团，以区分野毒株和疫苗株。通过对引物的筛选和反应条件的优化，建立了可鉴别PRV野毒株和疫苗株的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法，并对该方法的特异性、灵敏性、重复性和干扰性等进行评估。结果显示，该方法能同时特异性地检测出PRV野毒株和疫苗株，而与PPV、PCV2、PRRSV、CFSV、JEV等无交叉反应；该方法灵敏性高，对PRV gE和gB基因最低检测量分别为27.1 copies/μL和2.74 copies/μL;该方法重复性好，变异系数小于1%;用该方法对18份临床样本进行PRV gB和gE基因检测，且与普通PCR方法相比，符合率高达100%。结果表明，本试验建立的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法可用于临床样本中PRV野毒株和疫苗株的鉴别检测，为猪伪狂犬病防制和净化提供了一种有效的技术手段。

• 单位
  牧原食品股份有限公司; 河南农业大学; 医药学院; 河南牧业经济学院