端粒结合蛋白CTC1提高人乳腺癌细胞放射抗性的潜在作用机制

作者：刘礼; 袁昌劲; 余涛; 吕秀玮; 刘娇萍; 赖晓晶; 贺文煜

来源：广东医学, 2018, 39(08): 1148-1153.

DOI：10.13820/j.cnki.gdyx.2018.08.003

• 细胞凋亡
• 端粒
• 细胞周期
• DNA损伤修复

目的探讨端粒结合蛋白CTC1提高人乳腺癌细胞放射抗性的潜在作用机制。方法以单纯转染试剂的细胞作为空白对照(Mock组),siNC转染细胞作为阴性对照(siNC组),siCTC1#3转染细胞作为实验组(siCTC1#3组)。MDA-MB-435/MDA-MB-435R细胞分别以3×105个细胞浓度接种于铺有细胞爬片的6孔细胞培养皿中,待6 h左右细胞贴壁后,将细胞分为未处理组(untreated组)、单纯射线照射组(IR组)、siCTC1#3干扰组和射线照射联合siCTC1#3干扰组(IR+siCTC1#3组)。将siRNA(siCTC1#3和siNC)利用脂质体转染至MDA-MB-435/MDA-MB-435R细胞48 h后CCK8试剂盒检测细胞增殖及细胞毒性;台盼蓝染色测定细胞增殖动力学;Real time PCR检测细胞相对端粒长度;免疫荧光检测细胞的DNA损伤修复能力及CTC1蛋白与γH2AX的共定位情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;检测细胞Caspase-3的活性以明确细胞早期凋亡事件的触发情况。结果 siCTC1#3组与siNC组、Mock组增殖能力、相对端粒长度相比,差异有统计学意义(P<0.05);siCTC1#3组并没有明显引起细胞周期时相的改变(P>0.05);MDAMB-435R细胞与MDA-MB-435细胞相比,对数生长期的增殖速度、相对端粒长度、γH2AX焦点的数量差异有统计学意义(P<0.05);IR+siCTC1#3组与IR组相比,γH2AX的数量、细胞凋亡率、坏死率差异有统计学意义(P<0.05);在转染后24 h,MDA-MB-435和MDA-MB-435R细胞中siCTC1#3组Caspase-3的活性分别为相应Mock组的(4.36±0.53)倍和(3.21±0.24)倍(P<0.01)。结论端粒结合蛋白CTC1提高人乳腺癌细胞放射抗性的机制与该蛋白促进肿瘤细胞增殖、促进DNA损伤修复、抑制端粒缩短和抗细胞凋亡有关,而与调节细胞周期进程无关。

• 单位
  华中科技大学; 同济医学院附属武汉中心医院; 武汉生物工程学院