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摘要
目的:研究Western blot方法中上样总蛋白量的不同对实验结果的影响。方法:收取正常成年人血清标本,测总蛋白浓度,然后分别以原血清,稀释2倍、5倍、10倍以及20倍血清等体积上样,以6%SDS-PAGE凝胶分离,拍照。结果:当上样量大于100μg时,电泳后血清条带模糊不清,无法找出目的条带进行后续步骤的操作分析。当上样量在20～100μg时,电泳后不同分子量的血清条带区分明显且边界清楚,有利于后续分析步骤的进行。当上样量在10μg及10μg以下时,电泳所得血清蛋白条带颜色较淡,提示总蛋白量不足,影响后续分析的灵敏度。结论:Western blot总蛋白上样量的不同直接关系到电泳后不同分子量目的条带的清晰程度,20～100μg的血清总蛋白上样量可以作为Western blot上样量的参考范围。
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