狂犬病病毒核蛋白的原核表达及纯化

作者：焦文强; 胡永浩; 殷相平; 李志勇; 柳纪省

来源：贵州农业科学, 2009, (12): 136-139.

• 狂犬病病毒
• 核蛋白
• 原核表达 rabies virus
• nucleoprotein
• prokaryotic expression

采用RT-PCR方法扩增出狂犬病病毒(RV)CVS株核蛋白(N)基因,并将目的基因亚克隆入原表达载体pET-28a(+)中,经PCR、双酶切以及序列分析,结果表明:已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化至大肠埃希氏菌Rossetta(DE3),在37℃,1 mmol/LIPTG条件下进行诱导表达。诱导产物经SDS-PAGE分析,在分子量约为54 KD附近出现较粗的目的带,与预期的目的蛋白分子量相符合。经表达条件优化,用1 mmol/LIPTG在37℃诱导表达5h,表达量达到最高,Western-Blotting鉴定目的蛋白有较强的免疫原性。为狂犬病毒的N蛋白的新型疫苗的制备奠定了基础。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃农业大学