肠胶质细胞系TRPV4依赖性Ca2+内流、ATP释放与炎症因子表达

作者：谭千山; 陈君; 谢会超; 李立奇; 陈帅帅; 董辉; 肖卫东^*

来源：陆军军医大学学报, 2023, 45(05): 417-425.

DOI：10.16016/j.2097-0927.202211062

• 肠胶质细胞
• 瞬时感受器电位离子通道香草素受体4
• 2+信号" name="keyword">Ca2+信号
• 三磷酸腺苷
• 炎症

目的 探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)在调节肠胶质细胞外Ca2+内流中的作用及其意义。方法 收集大鼠肠胶质细胞系CRL-2690、大鼠肠上皮细胞系IEC6和人胚肾细胞系HEK293T样本，采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光方法检测TRPV4的mRNA、蛋白表达与定位；将CRL-2690细胞依次分为GSK组与GSK+HC组，低渗组与低渗+HC组，GdCl3组与GdCl3+HC组以及CaCl2组与CaCl2+HC组，采用Fura-2荧光探针和单细胞荧光Ca2+检测仪评估CRL-2690细胞中TRPV4通道活性。将CRL-2690细胞分为对照组、GSK组与GSK+HC组，通过荧光素-荧光素酶实验测量细胞ATP的释放水平；采用RT-qPCR检测炎症相关基因GFAP、IL-1β、IL-6、IL-10的mRNA表达。结果 在大鼠肠胶质细胞系CRL-2690中检测到TRPV4 mRNA和蛋白表达；TRPV4特异性激动剂GSK1016790A和低渗透压刺激明显增强了CRL-2690细胞内钙荧光强度，而TRPV4特异性抑制剂HC067047可抑制此作用(0.430 38±0.063 65 vs 0.004 23±0.005 78,P<0.000 1);钙敏感受体(calcium-sensing receptor, CaSR)激活诱导的外Ca2+内流也可被HC067047所抑制(P<0.05);功能上，激活TRPV4可促ATP释放、EGC反应性增生标志物GFAP和炎症因子IL-1β、IL-6的表达，并抑制抗炎因子IL-10的表达，该作用可被HC067047所抑制(P<0.05)。结论 激活TRPV4可引起肠胶质细胞外Ca2+内流，并促进ATP释放与炎症因子表达，可能参与肠道炎症的发生。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 第三军医大学