稳定表达RFP-GFP-LC3的大鼠胰岛β细胞株的构建

作者：周佳丽; 吴艳阳; 罗玉霜; 袁玉菊; 刘明俊; 刘东波^*

来源：生命科学研究, 2019, 23(02): 87-91.

DOI：10.16605/j.cnki.1007-7847.2019.02.001

• 糖尿病
• 自噬
• 慢病毒转染
• RIN-m5f细胞株

为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚焦进行活细胞拍摄验证,得到100%表达RFP-GFP-LC3质粒的细胞株。无血清饥饿处理细胞,结果显示:饥饿组GFP/RFP荧光点比值较对照组下降, P62蛋白表达量以及S6K磷酸化水平降低,加入10μmol/L氯喹部分抑制自噬后, GFP/RFP荧光点比值回升。以上结果表明稳定表达RFP-GFP-LC3的RIN-m5f构建成功,并能够以简单的检测方式准确表达自噬全过程,为自噬在糖尿病药物机理方面的研究奠定了基础。

• 单位
  国家中医药管理局; 湖南农业大学