金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrE的表达、纯化及晶体生长

作者：张绍城; 郭珍; 张宏鹏; 苟冶然; 龙小滨; 汪德强

来源：重庆医科大学学报, 2014, 39(04): 529-533.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.000140

• 金黄色葡萄球菌
• 表面蛋白质SdrE
• 蛋白质表达纯化
• 蛋白质晶体培养
• 抗菌药物

目的:对金黄色葡萄球菌表面蛋白质(serine-aspartate repeat,SdrE)进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法:利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒pW28-SdrE,并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B834中表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化SdrE蛋白质,再用Hiload Superdex 200凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态,用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体。结果:(1)构建了重组质粒pW28-SdrE,并在E.coli B834中可溶性表达。(2)获得了纯度较高(85%)的SdrE蛋白质,该蛋白质在溶液中以单体形式存在。(3)培养出晶形较好、衍射能力较强的SdrE蛋白质单晶。结论:利用经典的蛋白质纯化技术和晶体培养技术,可以获得衍射能力较强的SdrE单晶,为其三维结构的解析和基于结构的新型特异性抗菌药物的研发提供了重要的基础。

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属第一医院