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摘要
旨在鉴定牛circMYH8以及探究其对牛肌原代细胞增殖的调控作用。设计合成circMYH8的divergent primer及convergent primer 2组引物，分别以牛背最长肌cDNA、RNase R处理的牛背最长肌cDNA以及牛背最长肌gDNA为模板进行PCR扩增，通过测序及琼脂糖凝胶电泳进行环状RNA鉴定；对circMYH8进行不同发育时期骨骼肌RT-qPCR分析、核质分离试验以及RNase R耐受性试验；构建及合成circMYH8的过表达载体及干扰片段，并转染至牛肌原代细胞中，通过RT-qPCR、Western Blot、EdU、流式细胞术等手段探究了circMYH8对牛肌原代细胞增殖表型的影响。结果表明，测序及琼脂糖凝胶电泳证实circMYH8为环状RNA;RT-qPCR分析显示，circMYH8在牛骨骼肌发育早期高表达，核质分离试验结果显示，circMYH8在细胞核和细胞质中都有表达，RNase R耐受性试验表明，circMYH8的稳定性高于其线性转录物；过表达circMYH8抑制了增殖标志基因的表达，EdU活性降低，而抑制circMYH8促进了增殖标志基因的表达，EdU活性上升，S期细胞比例上升。结果表明，牛circMYH8能显著抑制牛肌原代细胞增殖。
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