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摘要
目的评价小泛素相关修饰物(SUMO) E3连接酶(PIAS)调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的SUMO化修饰在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)内源性保护机制中的作用。方法实验Ⅰ清洁级野生型雄性C57BL/6小鼠24只, 6～8周龄, 体质量18～22 g, 采用随机数字表法分为4组(n=6):对照组(C组)、ALI组、ALI+ PPARγ诱导剂TZD组(ALI+T组)、ALI+TZD+SUMO化抑制剂漆树酸组(ALI+T+A组)。尾静脉注射LPS 15 mg/kg制备内毒素性ALI模型。ALI+T+A组注射LPS前1 h时腹腔注射漆树酸5 mg/kg;ALI+T组和ALI+T+A组注射LPS前30 min时腹腔注射TZD 50 mg/kg。给予LPS 12 h后处死小鼠取肺组织, 测定湿重/干重(W/D)比值, 光镜下观察病理学结果, 并行肺损伤评分;分别采用Western blot法和PCR法测定PIAS1、PIAS2、PIAS3和PIASy及其mRNA的表达。实验Ⅱ 体外培养的小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)采用随机数字表法分为4组(n=5):对照组(C组)、LPS组(L组)、LPS+ PIAS2 siRNA组(L+P组)和LPS+Con siRNA组(L+C组)。C组常规培养, 余3组给予10 μg/ml LPS刺激MH-S细胞, 制备内毒素攻击模型。L+P组和L+C组于加入LPS前48 h时分别转染50 nmol/L PIAS2 siRNA或Con siRNA。加入LPS孵育24 h时收集细胞, 检测细胞活力;采用流式细胞术检测肺泡M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞水平, 计算M1型/M2型比值;釆用Western blot法检测PIAS2和PPARγ表达, 采用免疫共沉淀法测定PPARγ-SUMO1共表达;采用PCR测定TNF-α和IL-10的mRNA表达。结果实验Ⅰ与C组比较, 其余3组肺损伤评分和肺组织W/D比值升高, PIAS2及其mRNA表达上调(P<0.05);与ALI组比较, ALI+T组和ALI+T+A组肺损伤评分和肺组织W/D比值降低, PIAS2及其mRNA表达上调(P<0.05);与ALI+T组比较, ALI+T+A组肺损伤评分和肺组织W/D比值升高, PIAS2及其mRNA表达下调(P<0.05)。4组间肺组织PIAS1、PIAS3和PIASy及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。实验Ⅱ与C组比较, 其余3组细胞活力降低, PPARγ表达和PPARγ-SUMO1共表达上调, M1型和M2型巨噬细胞水平、M1/M2型比值升高, TNF-α mRNA表达上调, IL-10 mRNA表达下调, L组和L+C组细胞PIAS2表达上调(P<0.05);与L组比较, L+P组细胞活力下降, PIAS2、PPARγ表达和PPARγ-SUMO1共表达下调, M1型巨噬细胞水平和M1型/M2型比值升高, TNF-α mRNA表达上调, IL-10 mRNA表达下调(P<0.05), L+C组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与L+C组比较, L+P组细胞活力下降, PIAS2、PPARγ表达和PPARγ-SUMO1共表达下调, M1型肺泡巨噬细胞水平和M1型/M2型比值升高, TNF-α mRNA表达下调, IL-10 mRNA表达上调(P<0.05)。结论 PIAS2调控PPARγ的SUMO化修饰是小鼠内毒素性ALI的内源性保护机制, 可能与抑制巨噬细胞向M1型极化, 减轻炎症反应有关。
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单位天津医科大学; 天津市南开医院
