PA-X基因的长度变化对H3N2犬流感病毒复制能力和致病性的影响

作者：李舜; 李桂珍; 原耀贤; 李康健; 马春全; 李守军; 黄良宗^*; 马骏^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(01): 272-280.

• 犬流感
• H3N2
• 反向遗传操作系统
• PA-X
• 致病性

H3N2犬流感病毒(canine influenza virus, CIV)已在中国多地的犬群中流行，是禽流感跨宿主感染并形成新分支的近期案例。研究表明，PA-X基因与甲型流感病毒适应新宿主的能力相关，且其长度能够影响甲型流感病毒的复制及致病能力。为了解PA-X基因的长度变化对H3N2 CIV复制能力及致病力的影响，本研究利用H3N2 CIV的8质粒操作系统，拯救了三株重组H3N2 CIV毒株：PA-X基因表达大小为232个氨基酸多肽的亲本病毒CIV＿PA-X＿232;对PA编码区第191、192位氨基酸的密码子进行改造，PA-X基因不表达蛋白的重组病毒CIV＿PA-X＿Knock;对PA+1编码区第232位氨基酸进行突变，PA-X基因表达大小为252个氨基酸多肽的重组病毒CIV＿PA-X＿252。通过比较3株重组病毒的聚合酶活性，在MDCK细胞中的复制效率及对小鼠致病性的差异，来评价表达不同长度的PA-X基因对H3N2 CIV的影响。结果显示，CIV＿PA-X＿252和CIV＿PA-X＿Knock的聚合酶活性显著(P<0.05)高于CIV＿PA-X＿232,且CIV＿PA-X＿252的聚合酶活性显著(P<0.05)高于CIV＿PA-X＿Knock; CIV＿PA-X＿252和CIV＿PA-X＿Knock在MDCK细胞中的复制能力显著(P<0.05)强于CIV＿PA-X＿232;小鼠攻毒试验结果显示，3株重组病毒对小鼠的体重变化无明显影响，且对小鼠无致死性；仅能在感染后第1天的小鼠肺中检测出3株重组病毒的TCID50,且病毒滴度无显著差异；3株重组病毒均能对小鼠肺造成病理损伤，其中，CIV＿PA-X＿252对小鼠的致病性最强，CIV＿PA-X＿232次之，CIV＿PA-X＿Knock对小鼠的致病性最弱。上述结果表明，PA-X基因的延长能够提高H3N2 CIV在MDCK细胞中复制能力和对小鼠肺造成病理损伤的能力，但该变化可能对H3N2 CIV在小鼠肺内的复制能力没有影响。本试验初步探究了PA-X基因的长度变化对H3N2 CIV的影响，为后续H3N2 CIV致病机制的研究提供了初步的参考。

• 单位
  动物科技学院; 佛山科学技术学院; 广东科贸职业学院; 华南农业大学